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微生物限度檢查方法——計數(shù)法的檢驗

發(fā)布日期::2021-10-14 作者: 瀏覽:0

計數(shù)法的檢驗

計數(shù)方法包括平皿法和薄膜過濾法。檢查時,按已驗證的計數(shù)方法進行供試品的**、霉菌及酵母菌菌數(shù)的測定。

1.平

常規(guī)法和培養(yǎng)基稀釋法都是平皿法。供試液通過離心沉淀以后也可用平皿法檢查。

采用平皿法進行菌數(shù)測定時,應取適宜的連續(xù)2~3個稀釋級的供試液。取供試液1ml,置直徑 90mm 的無菌平皿中(培養(yǎng)基稀釋法,則將 1ml供試液均勻分注入2個或以上的平皿中),注入15~20ml溫度不超過45℃的溶化的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基或玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基或酵母浸出粉胨葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基,混人,凝固。倒置培養(yǎng)。每稀釋級每種培養(yǎng)基至少制備2個平板。

陰性對照試驗 取試驗用的稀釋液 lml,置無菌平皿中,注入培養(yǎng)基,凝固,倒置培養(yǎng)。每種計數(shù)用的培養(yǎng)基各制備2個平板,均不得有菌生長。

培養(yǎng)和計數(shù) 除另有規(guī)定外,**培養(yǎng) 48 小時,逐日點計菌落數(shù),一般以 48小時的菌落數(shù)報告∶霉菌、酵母菌培養(yǎng) 72.小時,逐日點計菌落數(shù),般以72 小時的菌落數(shù)報告;必要時,可適當延長培養(yǎng)時間至5~7天進行菌落汁數(shù)并報告。菌落蔓延生長成片的平板不宜計數(shù)。點計菌落數(shù)后,計算各稀釋級供試液的平均菌落數(shù),按菌數(shù)報告規(guī)則報告菌數(shù)。若同稀釋級兩個平板的菌落平均數(shù)不小于 15,則兩個平板的菌落數(shù)不能相差1倍或以上。

一般營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基用士**計數(shù)∶ 改瑰紅鋼瓊脂培養(yǎng)基用干霉菌及酵母菌計數(shù);酵母浸出粉胨陳葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基用干酵母菌計數(shù)。在特殊情況下, 若營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基上長有霉菌和酵母菌、玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基上長有**,則應分別點汁霉菌和酵母菌、**菌落數(shù)。然后將營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基上的霉菌和酵母菌數(shù)或玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基上的**數(shù),與玫現(xiàn)紅鈉瓊脂培養(yǎng)基中的霉菌和整母菌數(shù)或營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基中的**數(shù)進行比較,以菌落數(shù)高的培養(yǎng)基中的菌數(shù)為計數(shù)結果。

 含蜂蜜、王漿的液體制劑,用玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基測定霉菌數(shù),用酵母浸出粉胨葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基測定酵母菌數(shù),合并計數(shù)。

菌數(shù)報告規(guī)則 宜選取**、酵母菌平均菌落數(shù)在 30~300 之間、霉菌平均菌落數(shù)在 30~100 之間的稀釋級,作為菌數(shù)報告(取兩位有效數(shù)字)的依據(jù)。

1)當僅有1個稀釋級的菌落數(shù)符合上述規(guī)定,以該級的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)的值報告菌數(shù)。

2)當同時有 2個稀釋級的菌落數(shù)符合上述規(guī)定時,視兩者比值(比值為高稀釋級的菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)的值除以低稀釋級的菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)的值)而定。若比值不大于2,以兩稀釋級的菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)的均值報告菌數(shù);若比值大于2但不超過5時,以低稀釋級的菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)的值報告菌數(shù);當出現(xiàn)比值大于5,或高稀釋級的菌落數(shù)大于或等于低稀釋級的菌落數(shù)等異常情況時,應查明原因再行檢查,稀釋級的菌落數(shù)大于或等于低稀釋級的菌落數(shù)等異常情況時,應查明原因再行檢查,必要時,應進行方法的重新驗證。

3)當各稀釋級的平均菌落數(shù)均小于 30,以*低稀釋級的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)的值報告菌數(shù)。

4)如各稀釋級的平板均無菌落生長,或僅*低稀釋級的平板有菌落生長,

但平均菌落數(shù)小于1時,以<1乘以*低稀釋倍數(shù)的值報告菌數(shù)。


薄膜過濾法

采用薄膜過濾法,濾膜孔徑應不大于0.45μm,直徑約為 50mm。選擇濾膜材質時應保證供試品及其溶劑不影響微生物的充分被截留。濾器及濾膜使用前應采用適宜的方法**。使用時,應保證濾膜在過濾前后的完整性。水溶性供試液過濾前先將少量的沖洗液過濾以潤濕濾膜。油類供試品,其濾膜和過濾器在使用前應充分干燥。為發(fā)揮濾膜的*大過濾效率,應注意保持供試品溶液及沖洗液覆蓋整個濾膜表面。供試液經(jīng)薄膜過濾后,若需要用沖洗液沖洗濾膜,每張濾膜每次沖洗量為100ml。每片濾膜的總過濾量不宜過大,以避免濾膜上的微生物受損傷。


操作步驟

取相當于每張濾膜含 1g 或lml供試品的供試液,加至適量的稀釋劑中,混勻,過濾。若供試品每 1g 或 Iml 所含的菌數(shù)較多時,可取適宜稀釋級的供試液 lml,過濾。用pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液或其他適宜的沖洗液沖洗濾膜,沖洗方法和沖洗量同"計數(shù)方法的驗證"。沖洗后取出濾膜,菌面朝上貼于營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基或玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基或酵母浸出粉胨葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基平板上培養(yǎng)。每種培養(yǎng)基至少制備一張濾膜。

陰性對照試驗 取試驗用的稀釋液lml照上述薄膜過濾法操作,作為陰性對照。陰性對照不得有菌生長。

培養(yǎng)和計數(shù) 培養(yǎng)條件和計數(shù)方法同平皿法,每片濾膜上的菌落數(shù)應不超過 100 個。

菌數(shù)報告規(guī)則 以相當于1g 或 lml供試品的菌落數(shù)報告菌數(shù);若濾膜上無菌落生長,以<1報告菌數(shù)(每張濾膜過濾1g或1ml供試品),或<1乘以*低稀釋倍數(shù)的值報告