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微生物限度檢查方法——控制菌檢查法

發(fā)布日期::2021-10-15 作者: 瀏覽:0

控制菌檢查法

供試品的控制菌檢查應(yīng)按已驗證的方法進行,增菌培養(yǎng)基的實際用量同控制菌檢查方法的驗證。

陽性對照試驗 供試品進行控制菌檢查時,應(yīng)做陽性對照試驗。陽性對照試驗的加菌量10~100cfu,方法同供試品的控制菌檢查。陽性對照試驗應(yīng)檢出相應(yīng)的控制菌。

陰性對照試驗 取稀釋液 10m1 照相應(yīng)控制菌檢查法檢查,作為陰性對照。陰性對照應(yīng)無菌生長。

陰性對照試驗 取稀釋液10m1照相應(yīng)控制菌檢查法檢查,作為陰性對照。陰性對照應(yīng)無菌生長。

控制菌檢查采用培養(yǎng)基稀釋法時,可加大增菌培養(yǎng)基的用量。


基本程序


供試液制備 → 增菌培養(yǎng) → 選擇性培養(yǎng)基培養(yǎng) → 挑取疑似菌落 → 生化試驗 → 報告結(jié)果

1.大腸菌群的檢查

取含適量(不少于 10m1)的膽鹽乳糖發(fā)酵培養(yǎng)基管3支,分別加入1∶10 的供試液lml(含供試品0.1g 或0.1m1)、1∶100的供試液lml(含供試品0.01g或0.OIml)、1∶1000的供試液lml(含供試品0.001g 或0.001ml),另取1支膽鹽乳糖發(fā)酵培養(yǎng)基管加入稀釋液lml作為陰性對照管。培養(yǎng) 18~24小時。

膽鹽乳糖發(fā)酵管若無菌生長、或有菌生長但不產(chǎn)酸產(chǎn)氣,判該管未檢出大腸菌群;若產(chǎn)酸產(chǎn)氣,應(yīng)將發(fā)酵管中的培養(yǎng)物分別劃線接種于曙紅亞甲藍(lán)瓊脂培養(yǎng)基或麥康凱瓊脂培養(yǎng)基的平板上,培養(yǎng)18~24 小時。

若平板上無菌落生長,或生長的菌落與表2所列的菌落形態(tài)特征不符或為非革蘭陰性無芽孢桿菌,判該管未檢出大腸菌群;若平板上生長的菌落與表 2 所列的菌落形態(tài)特征相符或疑似,且為革蘭陰性無芽孢桿菌,應(yīng)進行確證試驗。

                             表2 大腸菌群菌落形態(tài)特征

培養(yǎng)基

菌落形態(tài)

曙紅亞甲藍(lán)瓊脂

呈紫黑色、淺紫色、紅色或粉紅色,圓形,扁平或稍凸起,邊緣整齊,表面光滑,濕潤

麥康凱瓊脂

鮮桃紅色或粉紅色,圓形,扁平或稍凸起,邊緣整齊,表面光滑,濕潤


確證試驗 從上述分離平板上挑選4~5個疑似菌落,分別接種于乳糖發(fā)酵管中,培養(yǎng) 24~48小時。若產(chǎn)酸產(chǎn)氣,判該膽鹽乳糖發(fā)酵管檢出大腸菌群,否則判未檢出大腸菌群。根據(jù)大腸菌群的檢出管數(shù),按表3報告 1g 或lml供試品中的大腸菌群數(shù)。

                           表3 可能的大腸菌群數(shù)表

各供試品量的檢出結(jié)果

可能的大腸菌群數(shù)N (個/g或ml)

0.1g或0.1ml

0.01g或0.01ml

0.001g 或0.001m1

+

+

+

-

+

+

-

-

+

-

-

-

>103

102<N<103

10<N<102

<10

                       注∶+代表檢出大腸菌群;一代表未檢出大腸菌群。


2.梭菌檢查

取供試液 10ml(相當(dāng)于供試品1g、lml)2份,其中1份置80℃保溫 10分鐘后迅速冷卻。上述 2份供試液直接或處理后分別接種至 100ml的新鮮庖肉培養(yǎng)基中。各培養(yǎng)基管在厭氧條件下培養(yǎng)72~96小時。如試驗管不出現(xiàn)渾濁、產(chǎn)氣、消化碎肉、臭氣等現(xiàn)象,判供試品未檢出梭菌;否則,應(yīng)取上述培養(yǎng)物0.2m1,涂抹接種于含慶大霉素的哥倫比亞瓊脂培養(yǎng)基平板上,在厭氧條件下培養(yǎng) 48~72小時;若平板上無菌落生長,判供試品未檢出梭菌;若平板上有菌落生長,應(yīng)挑選2~3個菌落分別進行革蘭染色和過氧化氫酶試驗。

過氧化氫酶試驗 取上述平板上的菌落,置潔凈玻片上,滴加3%過氧化氫試液,若菌落表面有氣泡產(chǎn)生,為過氧化氫酶試驗陽性,否則為陰性。

若上述可疑菌落為革蘭陽性梭菌,有或無卵圓形或球形的芽孢,過氧化氫酶陰性,判供試品檢出梭菌,否則判供試品未檢出梭菌。


結(jié)果判斷

供試品檢出控制菌或其他致病菌時,按一次檢出結(jié)果為準(zhǔn),不再復(fù)試。

供試品的**數(shù)、霉菌和酵母菌數(shù)其中任何一項不符合該品種項下的規(guī)定,應(yīng)從同一批樣品中隨機抽樣,**復(fù)試兩次,以3次結(jié)果的平均值報告菌數(shù)。

眼用制劑檢出霉菌和酵母菌數(shù)時,須以兩次復(fù)試結(jié)果均不得長菌,方可判供試品的霉菌和酵母菌數(shù)符合該品種項下的規(guī)定。

若供試品的**數(shù)、霉菌和酵母菌數(shù)及控制菌三項檢驗結(jié)果均符合該品種項下的規(guī)定,判供試品符合規(guī)定;若其中任何一項不符合該品種項下的規(guī)定,判供試品不符合規(guī)定。